基因組dna提取方法及優缺點? 微信公衆号同名收錄于話題，接下來我們就來聊聊關于基因組dna提取方法及優缺點?以下内容大家不妨參考一二希望能幫到您!

基因組dna提取方法及優缺點

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#檢驗12

#PCR6

#技術7

#分子診斷10

基本原理

DNA經典的提取方法采用苯酚/氯仿提取法。其原理是根據酚是蛋白質的變性劑，反複抽提，使蛋白質變性，SDS（十二烷基磺酸鈉）将細胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白質或多肽，核蛋白變性降解，使DNA從核蛋白中遊離出來。DNA易溶于水，不溶于有機溶劑。蛋白質分子表面帶有親水基團，也容易進行水合作用，并在表面形成一層水化層，使蛋白質分子能順利地進入到水溶液中形成穩定的膠體溶液。當有機溶液存在時，蛋白質的穩定性遭到破壞，變性沉澱。離心後有機溶劑在試管底層（有機相），DNA存在于上層水相中，蛋白質則沉澱于兩相之間。酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白質。氯仿的作用是有助于水相與有機相分離和除去DNA溶液中的酚。抽提後的DNA溶液用2倍體積的無水乙醇在NaCl溶液存在下沉澱DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉澱中的鹽，真空幹燥，用TE緩沖液溶解DNA備用。

提取原則

1.保證核酸一級結構的完整性；

2.核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；

3.其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到最低程度；

4.其他核酸分子，如RNA，也應盡量去除。

為什麼用無水乙醇沉澱DNA

用無水乙醇沉澱DNA，這是實驗中最常用的沉澱DNA的方法。乙醇的優點是可以任意比和水相混溶， 乙醇與核酸不會起任何化學反應，對DNA很安全，因此是理想的沉澱劑。DNA溶液是DNA以水合狀态穩定存在，當加入乙醇時，乙醇會奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般實驗中，是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合，其乙醇的最終含量占67％左右。 因而也可改用95％乙醇來替代無水乙醇（因為無水乙醇的價格遠遠比95％乙醇昂貴）。 但是加95％的乙醇使總體積增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA損失也增大。

為什麼用TE緩沖液洗脫

是弱堿性,TE緩沖液是Tris（三羟甲基氨基甲烷） EDTA緩沖液，這種緩沖液我們一般用作溶解劑或保持劑，主要是調控PH，對DNA的堿基有保護性,(DNA在TE中的穩定性較好,不易被破壞其完整性或産生開環及斷裂),包括提取好的DNA也要放在TE緩沖液中保存.TAE是一種電泳緩沖液，主要用于DNA分子的電泳。

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