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影響PCR擴增結果的因素

知識 更新时间:2025-09-11 09:32:33

  1、引物:引物到用戶手頭前都是以幹粉形式存在的,幹粉很容易丢掉,引物溶解後可以測定一下OD,将所有引物的濃度調整到一緻,對實驗有一定幫助。

  2、高溫聚合酶:高溫聚合酶是非常穩定的,除非有蛋白酶的污染。但是不同公司提供的酶擴增是有差異的,活性定量和标示未必相同。選用表現一貫穩定的酶,而不是最便宜的。

  3、緩沖液:緩沖液一般不容易出問題,隻是使用前需要徹底融化混勻使用。

  4、溫度:變性和退火溫度是主要需要考慮的。

  5、模闆:PCR 的關鍵之一,模闆不是越多越好。

  6、dNTP: dNTP是PCR擴增體系中最不穩定的,反複凍融會使dNTP發生降解。

  7、Mg2+:是TAQ活性所必須的,濃度過高過低對反應都有比較大的影響。過低,合成效率會下降,過高,非特異性會加大。

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