AIDS的實驗室檢測主要包括HIV抗體、HIV核酸、CD4+T淋巴細胞、HIV基因型耐藥檢測等。HIV1/2抗體檢測是HIV感染診斷的金标準;HIV核酸定量(病毒載量)檢測和CD4+T淋巴細胞計數是判斷疾病進展、臨床用藥、療效和預後的兩項重要指标;HIV基因型耐藥檢測可為高效抗反轉錄病毒治療(HAART)方案的選擇和更換提供科學指導。
1.HIV1/2抗體、抗原檢測
包括篩查試驗(含初篩和複檢)和确證試驗。HIV1/2抗體篩查方法包括ELISA法、化學發光法或免疫熒光試驗、快速檢測(斑點ELISA和斑點免疫膠體金或膠體硒快速試驗、明膠顆粒凝集試驗、免疫層析試驗)等,确證試驗常用的方法是免疫印迹法。
篩查試驗呈陰性反應可出具HIV1/2抗體陰性報告,見于未被HIV感染的個體,但處于窗口期的新近感染者篩查試驗也可呈陰性反應。若呈陽性反應,應用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑進行重複檢測,或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進行重複檢測,如兩種試劑複測均呈陰性反應,則為HIV抗體陰性;如有一種或兩種試劑呈陽性反應,需進行HIV抗體确證試驗。确證試驗無HIV特異性條帶産生,報告HIV1/2抗體陰性。确證試驗出現HIV1/2抗體特異帶,但不足以判定陽性,報告HIV1/2抗體不确定,可在4周後随訪。如帶型沒有進展或呈陰性反應,則報告陰性;如随訪期間發生帶型進展,符合HIV抗體陽性判定标準則為HIV抗體陽性,如帶型仍不滿足陽性标準,繼續随訪到8周。如帶型沒有進展或呈陰性反應則報告陰性;滿足HIV陽性診斷标準則報告陽性,不滿足陽性标準可視情況決定是否繼續随訪。經确證試驗HIV1/2抗體陽性者,出具HIV1/2抗體陽性确認報告,并按規定做好咨詢、保密和報告工作。
抗原檢測:主要檢測HIV1的P24抗原核心蛋白。感染早期和晚期,P24抗原以遊離形式出現,多數情況下以抗原抗體複合物形式存在。P24一般在感染後1-2周内即可檢出,随P24抗體産生而減少。一般持續0.5-5個月,如持續存在或再度出現則提示預後不良。
2.病毒載量測定
常用方法有反轉錄PCR(RT-PCR)、核酸序列依賴性擴增(NASBANuclisens)、分枝DNA信号放大系統(bDNA)和實時熒光定量PCR擴增(realtimePCR)。病毒載量測定的臨床意義包括預測疾病進程、提供開始抗病毒治療依據、評估治療效果、指導治療方案調整以及HIV感染早期診斷的參考指标。小于18月齡的嬰幼兒HIV感染診斷可以采用核酸檢測方法,以2次核酸檢測陽性結果作為診斷的參考依據,18月齡以後再經抗體檢測确認。HIV病毒載量檢測結果低于檢測下限,報告本次實驗結果低于檢測下限,見于沒有感染HIV的個體、接受成功的抗病毒治療或機體自身可有效抑制病毒複制的部分HIV感染者。HIV病毒載量檢測結果高于檢測下限,可作為診斷HIV感染的輔助指标,但不能單獨用于HIV感染的診斷。推薦病毒載量檢測頻率:對于已接受抗病毒治療6個月以上、病毒持續抑制的患者,可每6個月檢測1次。HAART6個月内或病毒載量抑制不理想或需調整治療方案時病毒載量的檢測頻率需根據患者的具體情況由臨床醫師決定。如條件允許,建議未治療的無症狀HIV感染者每年檢測1次,HAART初始治療或調整治療方案前、初治或調整治療方案初期每4~8周檢測1次。病毒載量低于檢測下限後,每3~4個月檢測1次,對于依從性好、病毒持續抑制達2~3年以上、臨床和免疫學狀态平穩的患者可每6個月檢測1次。
3.CD4+T淋巴細胞檢測
HIV感染人體後,出現CD4+T淋巴細胞進行性減少,CD4+/CD8+T細胞比值倒置,細胞免疫功能受損。如果進行HAART,CD4+T淋巴細胞在病程的不同階段可有不同程度的增加。目前常用的CD4+T淋巴細胞亞群檢測方法為流式細胞術,可以直接獲得CD4+T淋巴細胞數絕對值,或通過WBC分類計數後換算為CD4+T淋巴細胞絕對數。CD4+T淋巴細胞計數的臨床意義是了解機體的免疫狀态和病程進展、确定疾病分期和治療時機、判斷治療效果和HIV感染者的臨床合并症。CD4+T淋巴細胞計數的檢測間隔時間需根據患者的具體情況由臨床醫師決定,建議對于CD4+T淋巴細胞數350個/μL的HIV無症狀感染者,每6個月檢測1次;對于已接受抗反轉錄病毒治療的患者在治療的第1年内每3個月檢測1次,治療1年以上且病情穩定的患者可改為每半年檢測1次。
4.HIV基因型耐藥檢測
耐藥測定方法有基因型和表型,目前國内外多采用基因型檢測。推薦在以下情況進行HIV基因型耐藥檢測:抗病毒治療病毒載量下降不理想或抗病毒治療失敗需要改變治療方案時;如條件允許,在抗病毒治療前,最好進行耐藥性檢測,以選擇合适的抗病毒藥物,取得最佳抗病毒效果。對于抗病毒治療失敗者,耐藥檢測須在病毒載量1000拷貝/ML且未停用抗病毒藥物時進行,如已停藥須在停藥4周内進行基因型耐藥檢測。HIV基因型檢測出現HIV耐藥,表示該感染者體内病毒可能耐藥,同時需要密切結合臨床,充分考慮HIV感染者的依從性、對藥物的耐受性及藥物的代謝吸收等因素進行綜合評判。改變抗病毒治療方案需要在有經驗的醫師指導下進行。HIV耐藥結果陰性,表示該份樣品通過基因型耐藥檢測未檢出耐藥性,但不能确定該感染者不存在耐藥情況。
5.病毒分離
常用方法為共培養法,即用正常人外周血液分離單個核細胞,加PHA刺激并培養後,加入患者單個核細胞。目前隻用于實驗研究,不作為診斷指标。
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